dpo(dual priming oligonucleotide)引物是由chun等[9]于2007年第1次提出,其特点在于它包含2个各自独立的特异性引物区域,5′端序列由18~25个碱基组成并与靶基因序列配对,3′端序列由6~12个碱基组成用来引导pcr反应的特异性延伸,这两段独立的特异性区域利用寡聚次(inosine,i)进行连接,由于比一般碱基的退火温度低,在退火时寡聚次形成类似泡状的结构,从而使5′和3′区域形两个独立功能的双特异性引物结构,而且由于其特殊的结构,引物自身以及引物之间很难形成二级结构且对退火温度不敏感,在一定范围内改变退火温度对检测特异性不产生影响,如图1所示。而且理论上5′和3′任何一个区域超过3个碱基不匹配就不能扩增,运用dpo引物这一特点,已建立了基于dpo引物的snp的检测方法[9]。目前,dpo引物已经被广泛应用于医学病原菌、食源性微生物等[10-11]。本研究拟运用dpo引物高特异性、不受退火温度影响等特征,结合sybr green ⅰ实时荧光pcr技术,建立一种特异性强、灵敏度高的植物乳杆菌检测方法。
植物乳杆菌是乳酸菌的一种,最适生长温度为30~35,厌氧或兼性厌氧,菌种为直或弯的杆状,单个、有时成对或成链状,最适ph 6. 5左右,属于同型发酵乳酸菌。此菌与其他乳酸菌的区别在于此菌的活菌数比较高,能大量的产酸,使水中的ph值稳定不升高,而且其产出的酸性物质能降解重金属;由于此菌是厌氧细菌(兼性好氧),在繁殖过程中能产出特有的乳酸杆菌素,乳酸杆菌素是一种生物型的防腐剂。
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