| 检测类型其他检测 | 其他检测类型特种设备检测 |
| 货号thinkgene001 | 实验类别RNA干扰 |
| 品牌康颜生物 |
rna干扰（rnai）技术服务
rna干扰（rnai）技术服务是一种转录后基因沉默机制（post-transcriptional gene silencing, ptgs），将与mrna同源的正义rna和反义rna组成的双链rna（dsrna）导入细胞，可以使mrna发生特异性的降解，从而抑制其相应基因的表达。由于rnai具有高度的序列专一性，可以特异地使特定基因沉默，获得功能丧失或降低突变，因此rnai可以作为一种强有力的研究工具，用于功能基因组的研究。
康颜生物应用国外知名公司的rnai designer平台，可对靶基因序列进行干扰位置效应评价和序列同源型分析，完成sirna/mirna多种序列的的设计，并提供从sirna合成、 rnai载体构建到rnai功能验证等全面的rnai解决方案。康颜生物技术团队rna干扰（rnai）技术服务技术负责人为单驰，博士期间研究方向为分子遗传学。单博士有8年实验操作经验，发表过多篇相关的sci论文。擅长植物转基因，酵母双/单杂交，免疫共沉淀，emsa，pull down，luciferase检测等一系列实验。所以我们可以为您提供前期实验原理、上下游实验指导、实验设计、实验流程、结果分析、文章指导等全方位的服务。实验全程由单博士负责及操作，切实为您提供高品质的双分子荧光互补技术服务。任何技术问题7*24h在线为您解答。
1. sirna合成
对于瞬时基因沉默实验，化学合成sirna的方法操作简便，容易获得高水平的瞬时沉默效果，特异性强。我们通过严格设计来增强sirna的专一性；针对某靶基因设计的3条 sirna可保证其中两条的knock-down效率达到75%（在转染效率大于80%的情况下）。在rnai效应阶段，sirna双链结合一个核酶复合物从而形成所谓rna诱导沉默复合物（rna-induced silencing complex，risc）。激活的risc通过碱基配对定位到同源 mrna转录本上，并在距离sirna 3&＃39;端12个碱基的位置切割mrna。
rna干扰（rnai）技术服务实验流程：
1）根据序列信息，进行化学合成；
2）纯化及定量；
3）冻干处理；
4）细胞转染预实验，优化转染条件；
5）瞬时转染或稳定转染；
6）rt-pcr或western blot检测转染后某一时间点靶基因的rna水平或蛋白水平的变化。
客户提供：
1）目的基因的accession number（human、mouse或rat种属）以及技术要求（包括od和nmols的精确数量、纯化类型和修饰要求等）；
2）细胞株和详细的细胞培养的操作步骤；
3）一抗（如果需要western blot检测）。
我们提供：
1）转染效率分析；
2）knock-down结果。
质量保证：
针对某靶基因设计的3条sirna可保证其中2条的knock-down效率达到75%（在转染效率大于80%的情况下）。
2. 构建shrna表达载体
构建shrna表达载体，实现shrna在细胞中稳定表达，弥补瞬时转染持续时间短的不足。
服务流程：
1）mrna序列分析；
2）引物设计及合成；
3）单链互补引物退火；
4）将片段克隆至载体；
5）测序以确保插入序列正确性；
6）细胞转染预实验，优化转染条件；
7）瞬时转染或稳定转染；
8）rt-pcr或western blot检测转染后某一时间点靶基因的rna水平或蛋白水平的变化。
客户提供：
1）目的基因的accession number（human、mouse或rat种属）；
2）细胞株和详细的细胞培养的操作步骤；
3）一抗（如果需要western blot检测）。
我们提供：
1）构建好的表达载体和相应的甘油菌；赠送阴性对照甘油菌；
2）测序报告；
3）转染效率分析；
4） knock-down结果。
质量保证：
针对某靶基因设计的3条shrna序列，在转染效率>80%的前提下，我们保证至少有1个克隆可以达到70%转录水平的沉默效率。
3. mirna的构建
rnai载体利用细胞内源性的mirna加工机制，相比传统shrna载体可更高效地表达rna发夹结构，并具有采用gfp进行表达追踪的优点。每个基因设计的4条序列我们保证至少有2条可以达到至少70%转录水平的knock-down效率（在转染效率大于80%的情况下）。
实验流程：
1）针对特定基因，设计mir rnai序列，合成该序列并退火生成双链dna；
2）将dna与载体连接并转化；
3）测序验证mirna序列的正确性；
4）细胞转染预实验，优化转染条件；
5）瞬时转染或稳定转染；
6）rt-pcr或western blot检测转染后某一时间点靶基因的rna水平或蛋白水平的变化。
客户提供：
1）目的基因的accession number（human、mouse或rat种属）；
2）细胞株和详细的细胞培养的操作步骤；
3）一抗（如果需要western blot检测）。
rna干扰（rnai）技术服务我们提供：
1）构建好的表达载体和相应的甘油菌；赠送阴性对照甘油菌；
2）测序报告；
3）转染效率分析；
4） knock-down结果。
质量保证：
针对某靶基因设计的3条mirna序列，在转染效率>80%的前提下，我们保证至少有1个克隆可以达到70%转录水平的沉默效率。
服务说明：
1. rna干扰（rnai）技术服务不包括基因功能检测，如需检测，需要另外评估和收费；
2. 客户可以提供实验原材料，也可以查找本公司模板库、载体库、细胞库，也可以由我们公司代购。
康颜成立于2010年，由3位归国博士领衔创办，技术员均为中科院博士毕业，拥有多年实验操作经验及课题申报、实验设计、实验操作、各类大型实验仪器使用、sci论文撰写发表经验。在国内众多技术服务公司中，我们技术团队实力强劲，服务方式新颖，无论大小实验，每个项目均由创办人（中科院博士学历，多年操作经验）独立全程负责完成。且公司依托上海各大科研平台，拥有众多贵重仪器设备使用经验及方法。立志于提供国内高品质的生物专业技术服务。
公司长期致力于建立并完善多项基础生物技术服务平台。公司服务内容包括常规技术服务如基因克隆，定点突变，蛋白质表达纯化及检测，细胞学相关实验等，也包括基因芯片检测平台，crispr/cas9技术服务，microrna相关服务，酵母实验服务，rna干扰技术服务，抗体制备及纯化修饰服务，课题整体外包，动物模型的建立及相关实验服务等。针对以上各项服务，我们均有具有丰富服务经验和深厚专业背景的人员团队为您提供技术服务和支持。
上海康颜生物科技有限公司
刘先生
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